Medio Agar Hierro Lisina

CBTis

No.155

Agar Hierro Lisina

Integrantes:

Flores Hernández Cynthia Giselle

Ramírez Barragán Brenda Berenice

Maestro: Alfaro López Víctor Manuel

Mesa: 3

Grupo: 4L2M

Agar Hierro Lisina

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.

El Agar de Hierro y Lisina es un medio utilizado para la diferenciación de microorganismos entéricos en base a su capacidad para desaminar o descarboxilar la lisina y de producir sulfuro de hidrógeno. Este medio también es conocido como LIA Edwards y Fife desarrollaron este medio para diferenciar a Salmonella arizonae. Debido a que S. arizonae fermenta la lactosa rápidamente, la producción de H2S es suprimida en el Agar de Hierro y Triple Azúcar. Eliminando la lactosa e incorporando la lisina, Edwards y Fife encontraron que este medio diferencía a los bacilos entéricos en base a su capacidad para descarboxilar o desaminar la lisina y producir H2 S. Este medio es especialmente recomendado para la identificación de bacilos que fermentan rápidamente la lactosa. En este medio la peptona provee la fuente de carbono y nitrógeno. El extracto de levadura provee vitaminas y cofactores para el crecimiento. La dextrosa es la fuente de energía. El hidrocloruro de L-lisina es el sustrato donde actúan las enzimas descarboxilasa o desaminasa. El citrato férrico de amonio y el tiosulfato de sodio actúan como indicadores de la producción de H2S. El púrpura de bromocresol es un indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante.

Fundamento

En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8. Por decarboxilación de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La

decarboxilación de la lisina, tiene lugar en medio ácido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

Siembra

Por punción profunda con aguja de inoculación.

Incubación
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 °C.

Resultados

1- Decarboxilación de la lisina:

-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.

2-Desaminación de la lisina:

Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.

3-Producción de ácido sulfhídrico:

-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo)

Microorganismos	Color en el pico de flauta	Color en la base del tubo	Ennegrecimiento del medio
Proteus mirabilis ATCC 43071	Rojo	Amarillo	Negativo
Salmonella typhimurium ATCC 14028	Púrpura	Púrpura	Positivo
Salmonella enteritidis ATCC 13076	Púrpura	Púrpura	Positivo
Providencia spp.	Rojo	Amarillo	Negativo
Citrobacter freundii	Púrpura	Amarillo	Positivo
Morganella spp.*	Rojo	Amarillo	Negativo
Edwarsiella spp.	Púrpura	Púrpura	Positivo
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603	Púrpura	Púrpura	Negativo
Escherichia coli ATCC 25922	Púrpura	Púrpura	Negativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.

Características del medio
Medio preparado: color violeta.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código: B02-106-05	x 500g :Código: B02-106-06

Shigella

Shigella es un género bacteriano perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, integrado por bacterias de forma bacilar, no esporuladas, inmóviles, pero animados de movimiento pendular (oscilación) in situ.

Son gramnegativos, aerobios-anaerobios facultativos. Citocromo-oxidasa negativos. Fermentan la glucosa sin producción de gas; no obstante, se han encontrado algunos biotipos que producen gas de la glucosa. No decarboxilan la lisina. No fermentan la lactosa. No utilizan el citrato como única fuente de carbono. No crecen en el medio cianuro potásico. Su actividad bioquímica es muy reducida.

El género Shigella se divide en cuatro especies: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei.

Salmonella

Salmonella es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula (excepto la especie typhy ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H₂S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.

Es un agente productor de zoonosis de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual. Algunas salmonellas son comunes en la piel de tortugas y de muchos reptiles, lo cual puede ser importante cuando se manipulan a la vez este tipo de mascotas y alimentos.