jueves, 13 de mayo de 2010

Coprocultivo

CBTis

No.155


Coprocultivo


Integrantes:


Flores Hernández Cynthia Giselle

Ramírez Barragán Brenda Berenice


Maestro: Alfaro López Víctor Manuel


Mesa: 3


Grupo: 4L2M

I. INTRODUCCIÓN

coproultivo a la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de cultivo apropiados para el desarrollo de bacterias entéricas patógenas. Muestra adecuada es aquella que ha sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad, cuando es más fácil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administración de antimicrobianos.

Para realizar el examen se emplean heces que no tengan más de media hora de obtenidas, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodón. Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1º ml de un líquido conservador, o bien, depositar en éste el hisopo rectal.

OBJETIVO:

Identificar las especies patógenas de las vías gastrointestinales a través del coprocultivo y de sus reacciones bioquímicas

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

*Muestra de materia fecal en frasco con tapa.

*Placas estériles de: agar soya tripticaseína, agar EMB, agar endo, agar S-S, agar verde brillante.

*Tubo de 16 x 150 con 5 ml de caldo tetrationato.

*Tubo de 16 x 150 con 5 ml de caldo nutritivo estéril.

*Mechero, asa, incubadora.

Al día siguiente:

*Placas con coprocultivo.

*Equipo de coloración de Gram

*Serie de tubos de cultivo para pruebas bioquímicas: Agar Kligler, SIM medium, agar citrato de Simmons, agar manitol, caldo urea, caldo dextrosado, caldo V-P, gelatina, leche descremada, etc..

*Mechero, asa, tina, puente, piseta.

*Lámpara de alcohol.

MÉTODO

TOMENSE PRECAUCIONES DE ASEPSIA AL MANIPULAR LOS ESPECIMENES. AL INOCULAR EN LOS TUBOS ES INDISPENSABLE EL USO DE CUBREBOCAS Y GORRA. TRABAJAR SIEMPRE FRENTE A LA FLAMA DEL MECHERO

I) AISLAMIENTO.

1) Sembrar una asada de materia fecal sospechosa en el tubo de caldo de tetrationato. Inocular con asa por emulsión.

2) De la misma manera sembrar otra asada de la misma muestra en el tubo de caldo nutritivo.

3) Etiquetar con los datos escolares

4) Levar a la incubadora a 37ºC duarnte 24 horas. Colocar los tubos en gradilla de rejilla, de tal manera que se mantengan en posición vertical para evitar que el líquido se derrame.

II) RESIEMBRA.

AL INOCULAR LAS PLACAS, ES INDISPENSABLE EL USO DE CUBREBOCAS Y GORRA. TRABAJAR FRENTE A LA FLAMA.

1) Retirar los tubos de la incubadora.

2) Disponer sobre la mesa una serie de medios selectivos (agar EMB, agar S-S, agar verde brillante y agar soya tripticaseina) para resembrar el cultivo en caldo de tetrationato.

3) Disponer sobre la mesa una serie de los mismos medios selectivos para resembrar el cultivo en caldo nutritivo.

4) Resembrar en cada una de las placas el inóculo correspondiente por la técnica de estrias cruzadas sectoriales. Usar solo una asada para cada placa.

5) Sellar las placas. Etiquetar con los datos escolares

6) Llevar las placas a la incubadora. Colocarlas en posición invertida. Mantenerlas durante 24 horas.

Al día siguiente:

1) Retirar las placas de la incubadora.

2) Efectuar análisis macroscópico de cada una para valoración de la PRUEBA PRESUNTIVA respecto a la ferementación de la lactosa, de cauerdo a la siguiente:

GUIA DE IDENTIFICACION PRESUNTIVA

La prueba presuntiva para diferenciación de los bacilos entéricos gramnegativos se basa en la valoración de la fermentación de la lactosa sobre medios de cultivo adicionados con este carbohidrato, como el agar endo o el agar EMB:

a) Enterobacilos que producen fermentación rápida de la lactosa: Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae.

b) Enterobacilos que producen fermentación lenta de la lactosa: Edwarsiella, Serratia, Citrabacter, Arizona, Providencia, Erwinia.

c) Enterobacilos que no producen fermentación de la lactosa: Shigella, Salmonella, Proteus, Pseudomonas.

COPROCULTIVO

El perfil clínico del paciente será determinante en la elección de los medios de cultivo a inocular. En casos de pacientes ambulatorios se deben inocular medios selectivos para Salmonella, Shighella, y Campylobacter spp. Dos medios de preferencia para éstos patógenos son: Hektoen y XLD. Mac Conkey y Levine es recomendable cuando no es necesario un medio tan selectivo. En adición a éstos medios se debe utilizar Medios especiales para Campylobacter como el Agar Skirrow. Se debe agregar un medio no selectivo Agar Sangre al 5% , este medio es útil para detectar Staphylococcus aureus, levaduras o Pseudomona aeruginosa

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA

El conocimiento de los aspectos clínicos de la enfermedad puede dar claros indicios de la etiología de la misma. El tiempo de incubación puede sugerir una agente etiológico particular en epidemias, una historia de reciente utilización de antimicrobianos puede sugerir una enfermedad causada por Clostridium difficile. Una historia de viajes recientes puede sugerir enteropatógenos como Vibrio cholerae , V.parahaemolyticus .o E coli enterotoxigénica. El espectro de las manifestaciones clínicas es amplio y variable, ciertos síntomas pueden manifestarse en ciertas etiologías en particular : disentería ( amebiasis, shighellosis, E.coli enteroinvasiva) Diarrea con sangre (salmonelosis, campylobacteriosis, shighellosis E.coli verocitotogénica.ECET) Deposiciones como “agua de arroz” (cólera) Colitis hemorrágica o sindrome urémico hemolíticoSUH (E.coli verocitotoxigénica) Sindromes apendiculares (yersiniosis) Diarreas de corta incubación con vómitos como característica predominante (toxina Staphylococica).

La gran mayoría de las infecciones gastrointestinales resultan de la ingestión de una dosis suficiente del agente etiológico que permita atravesar las barreras protectoras del organismo como son barrera ácida del estómago, mucosa intestinal, motilidad intestinal, flora microbiana normal, los sistemas inmunes celulares y humorales, y los tejidos linfáticos asociados. Los síntomas pueden ser extremadamente severos en individuos que tengan comprometidos una o más de estas barreras.

El tiempo de incubación de la enfermedad es típicamente de 24 a 48 hrs. para la mayoría de los patógenos bacterianos , pero mucho más largo para otros como Campylobacter ( 3 a 11 días) y ECVT (3 a 5 días). Durante el período de incubación el agente se establece en el intestino, coloniza la mucosa ,se multiplica en grandes números y utiliza estrategias de virulencia como: adherencia, produccion de citotoxinas o enterotoxinas, e invasividad. La toxina del V.cholerae actúa en las células epiteliales de la mucosa a través de un receptor específico-GM1gangliosido-para estimular la adenilciclasa, que lleva al exceso de producción de AMP cíclico; lo que produce una producción excesiva de líquido con gran pérdida de iones Na y bicarbonato . La toxina termolábil y termoestable de la ECET actúan de manera similar resultando en síntomas parecidos al cólera. Otros patógenos entéricos que producen enterotoxinas son:Bacillus cereus y Clostridium perfringens. Las citotoxinas están etiológicamente relacionadas con las complicaciones sistémicas de esta infección como colitis hemorrágica y SUH

En contraste, los agentes etiológicos enteroinvasivos como Shighellae y ECEI tienen la habilidad de penetrar y multiplicarse dentro de las celulas epiteliales de la mucosa del colon produciendo su destrucción. Este proceso es asociado a una inflamación aguda, ulceración, que puede llevar a necrosis de la mucosa, características típicas de la disentería bacilar. El mecanismo de la E.coli enteropatógena es diferente ya que muestran una adherencia característica a las celulas epiteliales de la mucosa que se caracteriza por la destruccion del microvilli y una íntima adherencia a la célula que forma copas o pedestales en la base de las bacterias adheridas.

Los mecanismos de patogenicidad de varios agentes etiológicos aún deben ser dilucidados como: Campylobacter, Salmonella no tifosa, etc.

RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

La muestra de preferencia para el coprocultivo y el aislamiento de agentes bacterianos en diarrea es la muestra de heces recolectada durante el período agudo de la enfermedad. La muestra debe ser enviada inmediatamente al laboratorio después de obtenida. . Si la demora entre la toma de muestra y el procesamiento de ésta es mayor a dos horas , se debe enviar la muestra en Medio de transporte .La formulación del Medio Cary Blair es adecuada para la recuperación de la generalidad de las bacterias patógenas.

Hasta tres muestras es el número óptimo de coprocultivos para obtener un buen resultado en el aislamiento del agente infeccioso, especialmente cuando los síntomas no son claros y definitivos.

Las tinciones de Gram no son útiles pero la muestra al fresco con tinción de Loeffler puede ayudar a visualizar la presencia de leucocitos fecales, que en grandes números indican procesos inflamatorios. La morfología de los leucocitos predominantes es indicio del agente infeccioso.

patógeno

origen


procedimiento




enriquecimiento

cultivo

incubación

Aeromonas spp

agua


Agar Sangre

Agar CIN

48 hrs.a 35°C

aerobiosis

Bacillus cereus

Carnes, Salsas

Vegetales

Medio de

Carne picada

48Hrs.

Agar SangreSupl

Medio BCM

72 hrs.a 35°C

Anaerobiosis y

serología

Campylobacter

C.jejuni

C.coli

Agua,animales,carne,aves,

leche

Medio líquido

Enriquecido

x 24hrs.

Medio Skirrow

48 hrs.

Microaerofilia

A 42°C

Clostridium

difficile

Terapia

antimicrobiana


Agar cicloserina-

Cefotaxina-

fructosa

72 hrs.a 35°C

Anaerobiosis y

EIAs

Clostridium perfringens

Carnes

Productos carneos


Agar sangreSupl

Agar EYA

72 hrs. A 35°C

Anaerobiosis y

Detección enterotoxinas

E.coli

enteropatógena

Agua

alimentos


Mac Conkey

Mac Conkey+MUG

24 hrs a 35°C

Aerobiosis y

serología

E.coli

enteroinvasiva

alimentos


MacConkey

MacConkey+MUG

24 hrs a 35°C

Aerobiosis y

serología

E.coli

Verotoxigenica

Carnes

leche


MacConkey+

sorbitol

24 hrs a 35°C

Aerobiosis y

serología

Plesiomona

shighelloides

Agua

mariscos


Agar sangre

48 hrs. A 35°C

Atm 5% CO2

Salmonella spp.

No tifosa

Huevos, carnes

Leche,pescados

Caldo Selenito F

16 a 20 hrs.

Agar XLD

Agar Hektoen

A.bismuto sulf.

24 hrs a 35°C

Aerobiosis y

serología

Shighella spp

S.dysenteriae

Otras Shighella

Agua

Mariscos

alimentos

Caldo GN

16 hrs. A 35°C

Medio S.S.

Medio EMB

Mac Conkey

24 hrs. A 35°C

Aerobiosis y

serología

Staphylococcus

aureus

Lacteos, carnes,salsas,cramas


Agar Manitol

salado

24 hrs.a 35°C

aerobiosis

Vibrio cholerae

Agua

Mariscos

vegetales

Agua peptonada alcalina

16 a 20 hrs.

Agar TCBS

24 a 48hrs.

Aerobiosis y

serología

Vibrio parahaemolyticus

Mariscos

pescados

Agua peptonada

Alcalina

16 a 20 hrs

Agar TCBS

24- 48hrs.a 35°C

Aerobiosis y

serología

Yersinia enterocolítica

Agua

Carnes,alimentos

PBS 4-5°C por 72 hrs.

Agar CIN

24-48hrs a 35°C

aerobiosis

1 comentario:

  1. !Hola Srta., equipo 3¡ Trabajo revisado, buen trabajo sigan realizando presentaciones de calidad. solo les falta un espacio en el conocimiento. Deben de seguir adelante con ahincó. Gracias.

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